Dextranase-Pulver

4.2 Sample determination
4.2.1 enzyme-like preparation
The fermentation broth was centrifuged at 8000 rpm for 10 minutes, the supernatant was taken, and the enzyme solution was appropriately diluted by a certain multiple, so that the final OD540 was in the OD540 range of 0.1-0.6 mg / mL glucose content.

4.2.2 enzyme-like assay
(1) Take 900μL of pH 5.5 buffer to dissolve dextran T-2000 to make a 2.0% solution, add it as a substrate to four suitable test tubes, and place each test tube in a 55℃thermostatic water bath to incubate 5min.
(2) Add 0.1 mL of the appropriately diluted enzyme solution to three of the pre-heated test tubes, and add 0.1 mL of distilled water as the blank for the precise reaction for 10 minutes.
(3) Immediately add 2 mL of DNS to each of the above four test tubes and place in a boiling water bath for precise reaction for 5 min, then quickly cool down, and then make up to 25 mL with distilled water.
(4) The spectrophotometer is used to zero the instrument with water, and the absorbance of each sample tube and blank at 540 nm is measured in a cuvette with an optical path of 1 cm. Record data.
4.2.3 Calculation
Measure the average of the OD values of each measured parallel sample, and calculate the unit of enzyme activity according to the following formula

Dextranase activity (U / mL) = 1000 n (A-b) / (aMt)

Where A is the average value of sample OD540
 b and a are coefficients of the standard curve
 n: dilution ratio of enzyme solution
 t: enzymatic reaction time = 10
 M: Molar mass of glucose = 180.16

CERTIFICATE OF ANALYSIS

1 Prinzip

Dextranase-Pulver hydrolysiert 1,6-Î ± -D-Glucanglycosid-Bindungen und setzt reduzierende Zuckergruppen frei, um mit 3,5-Dinitrosalicylsäure (DNS-Reagenz) zu reagieren. Der Inhalt ist direkt proportional. Der Lichtabsorptionswert wird bei 540 nm gemessen, und die Standardkurve (berechnet als Glucose) kann verwendet werden, um die Menge an reduzierendem Zucker zu erhalten, und die Glucanaseaktivität kann basierend darauf berechnet werden.

2 Instrumente und Ausrüstung
2.1 Analysenwaage: Genauigkeit 0,0001 g
2.2 Wasserbad mit konstanter Temperatur: Genauigkeit ± 0,2 ƒ
2.3 Chronograph
2.4 Spektralphotometer
2,5 kochendes Wasserbad
2.6 Oszillierender Mischer

2,7 pH-Meter: Genauigkeit 0,01 pH-Einheit

3 Reagenzien und Lösungen

3.1 Herstellung von pH 5,5 Dinatriumhydrogenphosphat-Zitronensäure-Puffer: Lösung A: 20,369 g Dinatriumhydrogenphosphat-Dodecahydrat, gelöst mit etwa 200 ml Wasser; Lösung B: 4,530 g Zitronensäuremonohydrat mit etwa 200 ml Wasser. Mischen Sie Flüssigkeit A und Flüssigkeit B und machen Sie bis zu 500 ml. 20 Minuten bei 121 ° C sterilisieren.

3.2 Herstellung einer 2% igen Dextran (T-2000) -Lösung: 2 g Dextran (T-2000) genau in ein 100-ml-Becherglas einwiegen, pH = 5,5 Dinatriumhydrogenphosphat-Citrat-Puffer zum Auflösen zugeben und warten, bis nach vollständiger Auflösung auf 100 ml übertragen Messkolben und mit Puffer auf 100 ml auffüllen.

3.3 Vorbereitung der DNS-Lösung:
(1) 3,15 g 3,5-Dinitrosalicylsäure werden gewogen und mit etwa 500 ml Wasser gelöst. Es kann durch Erhitzen aufgelöst werden, aber die Temperatur darf 45 ° C nicht überschreiten.
(2) 20 g Natriumhydroxid werden gewogen und in etwa 200 ml Wasser gelöst.
Füge (2) zu (1) hinzu und füge dann 91 g Kaliumnatriumtartrat-Tetrahydrat, 2,5 g Phenol und 2,5 g wasserfreies Natriumsulfit hinzu. Nachdem es vollständig aufgelöst ist, füllen Sie es auf 1000 ml auf, geben Sie es in eine braune Flasche und stellen Sie es an einen kühlen und dunklen Ort. Nach 10 Tagen wurde es zur Verwendung durch Filterpapier filtriert. .
3.4 Herstellung der Standardglucoselösung

Glucoselösung (1 mg / ml): 0,100 g Glucose genau wiegen und mit einer Pufferlösung mit einem pH-Wert von 5,5 auf ein Endvolumen von 100 ml auflösen.

4 Analyseschritte

4.1 Zeichnung der Standardkurve
(1) Nehmen Sie etwa 1 Gramm Glukose, backen Sie sie 30 Minuten lang bei 60 ° C, erhöhen Sie dann die Temperatur auf 80 ° C, backen Sie dann 30 Minuten lang und erhöhen Sie dann die Temperatur auf 104 ° C, backen Sie 1 Stunde lang und für die spätere Verwendung abkühlen lassen.
(2) Herstellung einer wasserfreien Glucosestandardlösung: 0,1000 g Glucose werden genau gewogen, gelöst und auf 100 ml aufgefüllt.
(3) Nehmen Sie 6 kolorimetrische Röhrchen mit 25 ml Teilung und testen Sie sie gemäß der folgenden Tabelle:

Verpackung und Lagerung

Verpackungsbeutel für feste Lebensmittel, 25 kg / Barrel.

Dextranase-Pulver sollte an trockenen, kühlen und gut belüfteten Orten aufbewahrt werden, fern von Sonne und Hitze.

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