Katalase

Anwendung und Prinzip

Dieses Verfahren wird verwendet, um die Katalaseaktivität, ausgedrückt als Baker Units, von Präparaten zu bestimmen, die aus Aspergillus niger var, Rinderleber oder Micrococcus lysodeikticus stammen. Der Assay ist eine Erschöpfungsmethode, die auf dem Abbau von Wasserstoffperoxid durch Katalase und dem gleichzeitigen Abbau der Katalase durch das Peroxid unter kontrollierten Bedingungen basiert.

Reagenzien und Lösungen
Ammoniummolybdatlösung (1%) 1,0 g Ammoniummolybdat [(NH 4) 6 MoO 24 · 4H 2 O] (Merck, Katalog Nr. 1182) werden in Wasser gelöst und auf 100 ml verdünnt.
0,250 N Natriumthiosulfat 62,5 g Natriumthiosulfat (Na2S2O3 · 5H2O) werden in 750 ml kürzlich gekochtem und gekühltem Wasser gelöst, 3,0 ml 0,2 N Natriumhydroxid als Stabilisator zugegeben, mit Wasser auf 1000 ml verdünnt und gemischt. Standardisieren Sie wie angegeben für 0,1 N Natriumthiosulfat (siehe Lösungen und Indikatoren) und stellen Sie es gegebenenfalls auf genau 0,250 N ein.

Peroxidsubstratlösung 25,0 g wasserfreies zweibasisches Natriumphosphat (Na2HPO4) oder 70,8 g Na2HPO4 · 12H2O in etwa 1500 ml Wasser lösen und mit 85% iger Phosphorsäure auf pH 7,0 ± 0,1 einstellen. Vorsichtig 100 ml 30% iges Wasserstoffperoxid zugeben, in einem Graduierten auf 2000 ml verdünnen und mischen. In einer sauberen, locker verschlossenen Bernsteinflasche aufbewahren. Die Lösung ist länger als 1 Woche stabil, wenn sie in einem vollen Behälter bei 5 ° C aufbewahrt wird. (Bei frisch hergestelltem Substrat benötigt der Blindwert etwa 16 ml 0,250 N Natriumthiosulfat. Wenn der Blindwert weniger als 14 ml benötigt, ist die Substratlösung ungeeignet und sollte erneut frisch hergestellt werden. Die Probentitration muss zwischen 50% und 80% liegen % davon für den Rohling erforderlich.)

Verfahren
Pipettieren Sie ein Aliquot von nicht mehr als 1,0 ml der Probe, die zuvor auf ungefähr 3,5 Baker-Einheiten Katalase verdünnt wurde, in ein 200-ml-Becherglas. Fügen Sie schnell 100 ml Peroxidsubstratlösung hinzu, die zuvor auf 25 eingestellt war, und rühren Sie sofort 5 bis 10 s lang. Decken Sie das Becherglas ab und inkubieren Sie bei 25 ± 1, bis die Reaktion abgeschlossen ist. 5 s kräftig rühren und dann 4,0 ml aus dem Becherglas in einen 50-ml-Erlenmeyerkolben pipettieren. 5 ml 2 N Schwefelsäure in den Kolben geben, mischen, dann 5,0 ml 40% ige, frisch zubereitete Kaliumiodidlösung und 1 Tropfen Ammoniummolybdatlösung (1%) zugeben und mischen. Während Sie weiter mischen, titrieren Sie schnell mit 0,250 N Natriumthiosulfat bis zu einem farblosen Endpunkt, wobei Sie das als S erforderliche Volumen in Millilitern aufzeichnen. Führen Sie eine Blindwertbestimmung mit 4,0 ml Peroxidsubstratlösung durch und notieren Sie das erforderliche Volumen in Millilitern als B. B.

[Hinweis: Wenn aus Rinderleber gewonnene Präparate getestet werden, ist die Reaktion innerhalb von 30 Minuten abgeschlossen. Zubereitungen aus Aspergillus und anderen Quellen können bis zu 1 Stunde dauern. Führen Sie bei der Untersuchung eines Enzyms unbekannten Ursprungs nach 30 Minuten eine Titration durch und danach in Intervallen von 10 Minuten. Die Reaktion ist abgeschlossen, wenn zwei aufeinanderfolgende Titrationen gleich sind.]

Berechnung
Eine Baker-Einheit ist definiert als die Menge an Katalase, die unter den Bedingungen des Assays 264 mg Wasserstoffperoxid zersetzt.
Berechnen Sie die Aktivität der Probe anhand der Gleichung
Bäckereinheiten / g oder ml = 0,4 (BS) × (1 / C)

wobei C die Milliliter Aliquot der ursprünglichen Enzymzubereitung sind, die zu jeweils 100 ml Peroxidsubstratlösung gegeben werden, oder wenn 1 ml verdünntes Enzym verwendet wird, C der Verdünnungsfaktor ist; B ist das Volumen in Millilitern, wie oben definiert; und S sind die Milliliter von 0,250 N Natriumthiosulfat, wie oben definiert.

BESCHEINIGUNG ÜBER DIE ANALYSE

Verpackung und Lagerung

Verpackungsbeutel für feste Lebensmittel, 25 kg / Barrel.

Katalase sollte an trockenen, kühlen und gut belüfteten Orten aufbewahrt werden, fern von Sonne und Hitze.

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