Säureprotease
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Säureprotease

Diese Säureprotease wird verwendet, um die proteolytische Aktivität zu bestimmen, ausgedrückt als Hämoglobineinheiten auf Tyrosinbasis (HUT).

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Erzeugnis Schilderung


Anwendung und Prinzip

Diese Säureprotease wird verwendet, um die proteolytische Aktivität von Präparaten, die von Aspergillus oryzae var und Aspergillus niger var abgeleitet sind, ausgedrückt als Hämoglobineinheiten auf Tyrosinbasis (HUT), und kann verwendet werden, um die Aktivität anderer Proteasen bei pH 4,7 zu ​​bestimmen . Der Test basiert auf der 30-minütigen enzymatischen Hydrolyse eines Hämoglobinsubstrats bei pH 4,7 und 40 °. Nicht hydrolysiertes Substrat wird mit Trichloressigsäure ausgefällt und durch Filtration entfernt. Die Menge an solubilisiertem Hämoglobin im Filtrat wird spektrophotometrisch bestimmt.


Reagenzien und Lösungen der Säureprotease
Hämoglobin Verwenden Sie Hämoglobinsubstratpulver (Sigma Chemical Co., Katalog Nr. H2625) oder ein ähnliches hochwertiges Material, das vollständig wasserlöslich ist.
Acetatpufferlösung 136 g Natriumacetat (NaC2H3O2 · 3H2O) werden in ausreichend Wasser gelöst, um 500 ml herzustellen. 25,0 ml dieser Lösung mit 50,0 ml 1 M Essigsäure mischen, mit Wasser auf 1000 ml verdünnen und mischen. Der pH-Wert dieser Lösung sollte 4,7 ± 0,02 betragen.
Substratlösung Übertragen Sie 4,0 g des Hämoglobins in ein 250-ml-Becherglas, geben Sie 100 ml Wasser hinzu und rühren Sie 10 Minuten, um sich aufzulösen. Tauchen Sie die Elektroden eines pH-Meters in die Lösung und stellen Sie den pH-Wert unter ständigem Rühren durch Zugabe von 0,3 N Salzsäure auf 1,7 ein. Stellen Sie den pH-Wert nach 10 Minuten durch Zugabe von 0,5 M Natriumacetat auf 4,7 ein. Übertragen Sie die Lösung in einen 200-ml-Messkolben, verdünnen Sie sie mit Wasser auf das Volumen und mischen Sie. Diese Lösung ist im Kühlschrank ca. 5 Tage haltbar.
Trichloressigsäurelösung 140 g Trichloressigsäure werden in etwa 750 ml Wasser gelöst. Übertragen Sie die Lösung in einen 1000-ml-Messkolben, verdünnen Sie sie mit Wasser auf das Volumen und mischen Sie sie gründlich.

Probenvorbereitung Lösen Sie eine Menge der Probe in der Acetatpufferlösung, um eine Lösung herzustellen, die in jedem ml zwischen 9 und 22 HUT enthält. (Eine solche Konzentration erzeugt im folgenden Verfahren einen Extinktionswert innerhalb des bevorzugten Bereichs von 0,2 bis 0,5.)


Verfahren der Säureprotease
Pipettieren Sie 10,0 ml der Substratlösung in jedes einer Reihe von 25 × 150 mm-Reagenzgläsern: eines für jeden Enzymtest und eines für den Substratrohling. Erhitzen Sie die Röhrchen in einem Wasserbad etwa 5 Minuten lang auf 40 °. In jedes Röhrchen mit Ausnahme des Substratrohlings werden 2,0 ml der Probenvorbereitung gegeben, und die Reaktion wird zum Zeitpunkt der Zugabe der Lösung zeitlich festgelegt. 2,0 ml der Acetatpufferlösung in das Substratrohlingröhrchen geben. Verschließen Sie die Röhrchen mit Gummistopfen Nr. 4 und klopfen Sie jedes Röhrchen vorsichtig 30 Sekunden lang gegen die Handfläche, um es zu mischen. Erhitzen Sie jedes Röhrchen in einem Wasserbad genau 30 Minuten lang auf 40 ° und pipettieren Sie dann schnell 10,0 ml der Trichloressigsäurelösung in jedes Röhrchen. Schütteln Sie jedes Röhrchen etwa 40 Sekunden lang kräftig gegen den Stopfen und lassen Sie es dann 1 Stunde lang auf Raumtemperatur abkühlen, wobei Sie jedes Röhrchen während dieser Zeit in Abständen von 10 bis 12 Minuten gegen den Stopfen schütteln. Bereiten Sie die Enzymblanks wie folgt vor: Erhitzen Sie in getrennten Röhrchen 10,0 ml der Substratlösung und etwa 5 ml der Probenvorbereitung im Wasserbad 30 Minuten lang, geben Sie dann 10,0 ml der Trichloressigsäurelösung in die Substratlösung und schütteln Sie sie gut für 40 s und zu dieser Mischung 2,0 ml der vorgewärmten Probenvorbereitung geben. Nochmals schütteln und 1 h bei Raumtemperatur abkühlen lassen, dabei in Intervallen von 10 bis 12 min schütteln.
Schütteln Sie nach 1 Stunde jedes Röhrchen kräftig und filtrieren Sie durch 11 cm Whatman Nr. 42 oder ein gleichwertiges Filterpapier, wobei Sie die erste Hälfte des Filtrats durch dasselbe Papier filtern. Bestimmen Sie die Absorption jedes Filtrats in einer 1-cm-Zelle bei 275 nm mit einem geeigneten Spektrophotometer, indem Sie das Filtrat aus dem Substratrohling verwenden, um das Instrument auf Null zu setzen. Korrigieren Sie jeden Messwert, indem Sie den entsprechenden Enzymleerwert subtrahieren und den so erhaltenen Wert als AU aufzeichnen.
[Hinweis: Wenn kein korrigierter Extinktionswert zwischen 0,2 und 0,5 erhalten wird, wiederholen Sie den Test mit mehr oder weniger der Enzymzubereitung nach Bedarf.]

Standardkurventransfer 100,0 mg L-Tyrosin, chromatographisch oder äquivalent (Aldrich Chemical Co.), zuvor bis zur Gewichtskonstanz getrocknet, in einen 1000-ml-Messkolben. In 60 ml 0,1 N Salzsäure lösen. Wenn das L-Tyrosen vollständig aufgelöst ist, verdünnen Sie die Lösung mit Wasser auf das Volumen und mischen Sie sie gründlich. Diese Lösung enthält 100 µg Tyrosin in 1,0 ml. Bereiten Sie drei weitere Verdünnungen aus dieser Stammlösung vor, die 75,0, 50,0 und 25,0 µg Tyrosin pro ml enthalten. Bestimmen Sie die Absorption der vier Lösungen bei 275 nm in einer 1-cm-Zelle mit einem geeigneten Spektrophotometer gegenüber 0,006 N Salzsäure. Erstellen Sie eine Auftragung der Extinktion gegen die Tyrosinkonzentration. Bestimmen Sie die Steigung der Kurve in Bezug auf die Extinktion pro µg Tyrosin. Multiplizieren Sie diesen Wert mit 1,10 und notieren Sie ihn als AS. Ein Wert von ungefähr 0,0084 sollte erhalten werden.


Berechnung der Säureprotease
Eine HUT-Einheit von proteolytischen (Säureprotease) Aktivität ist definiert als die Menge an Enzym, die in 1 min unter den angegebenen Bedingungen ein Hydrolysat erzeugt, dessen Absorption bei 275 nm dieselbe ist wie die einer Lösung, die 1,10 ug / ml Tyrosin in 0,006 N Salzsäure enthält.
Berechnen Sie die HUT pro g der ursprünglichen Enzymzubereitung nach der Gleichung

HUT / g = (AU / AS) × (22 / 30W)

wobei 22 das Endvolumen der Testlösung ist; 30 ist die Reaktionszeit in min; und W ist das Gewicht der ursprünglich entnommenen Probe in g.

[Hinweis: Der Wert für AS beträgt unter sorgfältig kontrollierten und standardisierten Bedingungen 0,0084; Dieser Wert kann für Routinearbeiten anstelle des aus der Standardkurve erhaltenen Werts verwendet werden. Der genaue Wert, der aus der Standardkurve berechnet wird, sollte jedoch für genauere Ergebnisse und im Zweifelsfall verwendet werden.]


BESCHEINIGUNG ÜBER DIE ANALYSE


Produktname Säureprotease    
Anderer Name N / A Herkunftsland China
Belastung Aspergillus oryzae Herstellungsdatum 13. Mai 2019
Chargennummer SP19050903 Haltbarkeitsdatum 12. Mai 2021
Paket 25 kg / Eimer Menge 100 kg
PROTOKOLL SPEZIFIKATIONEN ERGEBNISSE METHODE
PHYSIKALISCHE & CHEMISCHE ANALYSE
Beschreibung braunes Pulver Entspricht Visuell
Geruch & Geschmack Charakteristischer Geruch und Geschmack Entspricht Geschmack
Feuchtigkeit NMT 7% 5,1% Feuchtigkeitsanalysator
IDENTIFIZIERUNG
Identifizierbare Aktivität Positiv für Bromelain-Aktivität Entspricht Im Haus
AKTIVITÄT
Proteaseaktivität NLT 500.000 HUT / g 508.270 HUT / g FCC VII
MIKROBIOLOGISCH
Gesamtzahl der Bakterien
Coliforme Bakterien (KBE / g)
Schimmelpilze und Hefen
E coli
Salmonellen
Staphylococcus aureus
Pseudomonas aeruginosa
NMT 3.000 KBE / g
NMT 30 KBE / g
NMT 100 KBE / g
Abwesend
Abwesend
Abwesend
Abwesend
500 KBE / g
10 KBE / g
10 KBE / g
Nicht erkannt
Nicht erkannt
Nicht erkannt
Nicht erkannt
FDA BAM Online Ch.3
FDA BAM Online Ch.4
FDA BAM Online Kap. 2
FDA BAM Online Ch.4
FDA BAM Online Ch.5
FDA BAM Online Ch.12
AOAC
SCHWERMETALLE
Führen
Merkur
Cadmium
Arsen
NMT 3 ppm
NMT 0,1 ppm
NMT 1 ppm
NMT 1 ppm
0,21 ppm
0,1 ppm
1 ppm
<1ppm
USP <231>
USP <231>
USP <231>
USP <231>
Lagerung: An einem kühlen und trockenen Ort vor Licht geschützt lagern, Trommel bei Nichtgebrauch in der Nähe halten.
Schlussfolgerung: Entspricht den IU-Standards.
Haltbarkeit: Die Haltbarkeit von Acid Protease unter vorgeschriebenen Lagerbedingungen und luftdichter Verpackung beträgt 2 Jahre.
Das Produkt entspricht den oben genannten Spezifikationen
Genehmigt von RICKY H. ZHU Zeichnungsberechtigter
*The above information is a direct translation of the information provided to Newgen Biotech from the manufacturer of Säureprotease. This Certificate of Analysis should be used for informational purposes and is not intended as a substitute for strict quality control analysis by the purchaser of this product.

Verpackung und Lagerung

Verpackungsbeutel für feste Lebensmittel, 25 kg / Barrel.


Säureprotease sollte an trockenen, kühlen und gut belüfteten Orten, fern von Sonne und Hitze, gelagert werden.

Zahlung :T / T, Paypal, Western Union, Alibaba Trade Assurance, VISA, MasterCard, E-Checking, späteres Bezahlen, LC usw.

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